مرکز منطقه ای اطلاع رسانی علوم و فناوری دانش میکروب شناسی 3 1 2023 8 26 Cloning of Streptococcal pyogenes Exotoxin, A gene in E. coli کلونینگ ژن اگزوتوکسین A استرپتوکوکوس پایوژنز در اشریشیا کلی 1 17 fa الهام سیاسی دانشگاه ازاد اسلامی واحد تهران شمال میترا صالحی سیمین میرجلیلی 2022 8 13 Aim and Background: Exotoxin A is one of the toxins which produce by group a streptococcuses. This Toxin is a protein soluble substance which causes scarlet fever and different kinds of infections as a super antigen. This toxin has antigenic property and special anti-toxins can neutralize it. In this research, was studied production of Streptococcus pyogenes exotoxin A recombinant protein in E. coli by cloning. Materials and methods: At the first, genome of the bacteria was extracted and used PCR. Then agarose gel electrophoresis was performed for detection of size and quality of the resulting amplicons. According to TA Cloning kit protocol, the target gene was inserted in to the PTG19 Cloning vector and the recombinant plasmid was inserted in to the E. coli XL1Blue bacteria. Eventually checking the sequencing data obtained from cloned gene in the vectore compared with the refrenece sequenece obtained from the NCBI database, confirm the success of the gene cloning by its correct sequence. Results: The results showed that PCR product is a fragment with a length of about 708 bais pairs. This is for the first time that the exotoxin A gene was cloned by the TA Cloning in the PTG19 Cloning vector and the E. coli XL1Blue host cell. The results of sequencing were confirmed presence of exotoxine A gene, speA. Conclusion: The speA gene was amplified and correct cloning was confirmed by TA Cloning with PTG19 vector and E. coli XL1Blue host cell. سابقه و هدف: اگزوتوکسین A یکی از توکسین‌هایی است که توسط استرپتوکوکوس‌های گروه A تولید می‌شود. این توکسین ماده محلول پروتئینی است که سبب ایجاد راش در تب مخملک شده و به عنوان سوپر آنتی‌ژن موجب بروز عفونت‌های منتشر می گردد. این توکسین خاصیت آنتی‌ژنیک داشته و آنتی‌توکسین اختصاصی علیه آن تولید می‌شود که قادر به خنثی کردن توکسین است. هدف از این تحقیق کلون و بررسی تولید پروتئین نوترکیب اگزوتوکسین A استرپتوکوکوس پایوژنز در اشریشیا کلی بود. مواد و روش‌ها: ابتدا ژنوم باکتری تخلیص شد و پس از انجام PCR به منظور بررسی اندازه و کیفیت قطعه تکثیر یافته الکتروفورز روی ژل آگارز صورت گرفت. طبق پروتوکل کیت TA کلونینگ، ژن مورد نظر وارد وکتور PTG19 گردید و پلاسمید نوترکیب حاصل به باکتری اشریشیا کلی XL1-Blue داخل گردید. در نهایت بررسی داده‌های حاصل از توالی‌یابی قطعه کلون شده در وکتور و مقیاسه آن با توالی مرجع در بانک اطلاعاتی NCBI ، صحت کلون این ژن با توالی صحیح تأیید شد. یافته‌ها: محصول PCR یک قطعه با طول 708 جفت باز بود. ژن اولین بار با استفاده از تکنیک TA کلونینگ در وکتور PTG19 و سلول میزبان اشریشیا کلی XL1-Blue کلون گردید. نتایج تعیین توالی قطعه کلون شده نشان دهنده شباهت کامل به ژن speA، کد کننده اگزوتوکسین A بود. بحث: ژن speA از باکتری استرپتوکوکوس پایوژنز تکثیر شد و با انجام تکنیک TA کلونینگ در وکتور PTG19 و سلول میزبان باکتری اشریشیا کلی XL1-Blue، صحت کلونینگ مورد تأیید قرار گرفت. http://jknm.rimag.ir/fa/Article/Download/43752